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熒光顯微鏡的發(fā)展為研究者進(jìn)一步深入調(diào)查提供的可靠信息
點(diǎn)擊次數(shù)：918 更新時(shí)間：2020-04-20
一、熒光顯微鏡簡(jiǎn)要原理
熒光顯微鏡的基本構(gòu)造通常由普通光學(xué)顯微鏡再加一些如熒光光源、激發(fā)濾片、雙色束分離器及阻斷濾片等附件的基礎(chǔ)上組成。同時(shí)采用的熒光光源一般為超高壓汞燈，它可發(fā)出各種波長(zhǎng)的光，且每種熒光物質(zhì)都會(huì)有一個(gè)產(chǎn)生強(qiáng)熒光的激發(fā)光波長(zhǎng)，這時(shí)需加置激發(fā)濾片，通常有紫外、紫色、藍(lán)色及綠色激發(fā)濾片，僅需使一定波長(zhǎng)的激發(fā)光透過并照射到標(biāo)本上，并將其他光都吸收掉。
二、影響到熒光顯微鏡成像效果的因素
影響熒光顯微鏡成像的熒光因素很多，主要包括：熒光樣品的制備，熒光光源的選擇，濾片轉(zhuǎn)盤的設(shè)計(jì)，熒光濾片的組合策略（激發(fā)光濾片，發(fā)射光濾片，雙色鏡分光濾片，帶寬選擇），顯微鏡物鏡種類，顯微鏡攝像系統(tǒng)的選擇等問題。熒光的激發(fā)、濾光、成像、淬滅，熒光實(shí)驗(yàn)的調(diào)整就是怎么才能協(xié)調(diào)好以上因素得到好的效果，其中影響到成像效果的一個(gè)重要因素即是熒光光源。
三、熒光顯微鏡光源種類及介紹
熒光顯微鏡的常用光源通常都是白光光源：高壓汞燈，氙燈，金屬鹵素?zé)艉蚅ED白光光源以及的LED單波長(zhǎng)光源。
1、汞燈
超高壓汞燈（50-200W），它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內(nèi)充一定數(shù)量的汞，工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電，引起汞蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當(dāng)汞*蒸發(fā)時(shí)，可達(dá)50～70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力，這一過程一般約需5～15min。
2、氙燈
氙燈和汞燈做為白光源，都能提供從紫外到近紅外一系列波長(zhǎng)的光，但它們卻有著不同的激發(fā)光譜。汞燈集中在近紫外、藍(lán)光以及綠光附近，這種在峰值的高激發(fā)能量確保產(chǎn)生明亮的熒光信號(hào)，但光毒性卻很強(qiáng)。
3、金屬鹵素?zé)?/div>
目前各大顯微鏡品牌廣泛使用的一種光源，它和汞燈的激發(fā)光譜很像，但它和顯微鏡以光纖相連，能散熱，壽命更長(zhǎng)。光纖從光源連到顯微鏡上，可以大量減少光產(chǎn)生的熱能。金屬鹵素?zé)魧?duì)活細(xì)胞成像的另一個(gè)優(yōu)勢(shì)是內(nèi)置強(qiáng)度設(shè)計(jì)裝置，可以容易調(diào)節(jié)激發(fā)光。也可以通過選擇直接連接獲得更好的激發(fā)效果。
4、LED白光熒光光源
這種光源的開關(guān)在毫秒間，減少樣品在光照下的暴露時(shí)間，延長(zhǎng)壽命。另外，LED光的衰減即快又精確，長(zhǎng)期活細(xì)胞試驗(yàn)下可大大減少光毒性。和白光相比，LED僅僅在一個(gè)較窄的光譜激發(fā)，多個(gè)LED波段使得LED光源能為多色熒光提供應(yīng)用。
5.LED單波長(zhǎng)熒光光源
此類光源屬于的熒光光源，價(jià)格昂貴。采用單波長(zhǎng)LED模塊設(shè)計(jì)，輸出單個(gè)波長(zhǎng)的熒光譜線，例如365nm/488nm/561nm/633nm,類似于激光光源。此類優(yōu)點(diǎn)突出；壽命長(zhǎng)，采用光電快速切換，有效避免物理震動(dòng)。LED單模塊光源的單色性好，極大的降低了白光光源的背景噪音，高效激發(fā)。程序控制適合整合到的成像系統(tǒng)中。
四、總結(jié)
在過去的十幾年中熒光顯微鏡以驚人的速度在進(jìn)化，與熒光顯微鏡密切相關(guān)的熒光染料及探針不斷被發(fā)明，光電技術(shù)發(fā)展同樣迅速，創(chuàng)新的激光共聚焦成像技術(shù)，多光子成像技術(shù)，脈沖激發(fā)技術(shù)，高靈敏度固態(tài)探測(cè)器，高數(shù)值孔徑物鏡和各種不斷開發(fā)出來的基于計(jì)算機(jī)圖像分析方法，幫助生物醫(yī)學(xué)研究者進(jìn)一步深入調(diào)查基于熒光的生物現(xiàn)象，讓研究者深入探究在自然環(huán)境中在活細(xì)胞內(nèi)。同時(shí)免疫熒光在醫(yī)學(xué)研究、診斷領(lǐng)域里的廣泛應(yīng)用，F(xiàn)ISH、各種熒光蛋白技術(shù)分別在基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)研究方面的推廣，生物醫(yī)學(xué)科研對(duì)儀器需要越來越高，先進(jìn)的的熒光儀器和配件的發(fā)展將毫無疑問地繼續(xù)。
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